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样品要求

概要:用含有 EDTA(紫头管)或肝素(绿头管)的 5 mL 采血管(根据具体实验具体选择)采集血液 3 mL,采血后立即轻轻颠倒混匀采血管 5-10 次,以确保抗凝剂发挥作用,采血后需在 30 min 内尽快离心分离出血浆(若不能尽快离心,采集的血液需放在 4℃冰箱保存,并必须在 8 h 内完成离心及分装),4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血浆)100uL 置于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。  2.血清的制备  用不含抗凝剂的 5 mL 采血管(红头管)或者含有促凝剂的采血管(黄头管) 采集血样 3 mL,或将采好血样的采血管室温静置(注意:不能振摇采血管)30 min-60 min 使其凝结后,再将采血管放入离心机内,4℃条件下 3000 rpm,离心10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血清)100ul 分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血清保存于-80℃冰箱中。  注意事项  检查血浆或血清是否有溶血,如果发生溶血,重新采样。样本最多保存 2 年。氧化脂质检测样本需密封避光保存。  3.尿液的制备  取尿液大于 1mL,在 4℃保存,静置;取 1mL 尿液进行离心分离,4℃条件下, 10000 rpm,离心 5 min;吸取上清液 100 uL 分装于合适的已编号的 EP 管中, 如此重复分装成多管以避免反复冻融,尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。  4.组织的制备  取大约 200mg 以上质量的组织样本,用生理盐水清洗组织,将每 100mg 组织样本分装入管中以避免反复冻融,尽快将组织样本保存于液氮速冻。如果达不到液氮温度,尽可能的存放在-80℃冰箱中。  注意事项  需要注明组织部分,如胃肠道具体哪一段,肺脏具体是哪一叶,肝脏具体是哪一叶,肾脏是髓质还是皮质,肿瘤组织是边缘还是中心等。  5.粪便的制备  1)人粪便样本的采集  将粪便排泄到干净的容器中,尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染, 取同段样本或将所有样本混匀后再取样,用无菌勺对粪便进行挖取,将适量粪便样本放入无菌保存管中,样本需 1g 左右,对样本进行分装,以避免反复冻融, 采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行保存。  2)小鼠/大鼠粪便样本的采集  将待取样的小鼠/大鼠放进干净的铺有消毒滤纸的笼子里,排便后立即用灭菌的镊子夹到无菌冻存管中,小鼠粪便样本通常需要 6-8 粒,大鼠粪便样本 1-2 粒,若样本需要重复检测,可用无菌棒混匀后分装成几管,每管至少 200 mg,避免反复冻融,样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。  注意事项  根据样本搜集时实际条件的不同,可依次考虑如下几个搜集方式。其中 A 为金标准,B,C 搜集方式会导致一些代谢物的变化,但也可进行代谢组检测。  A:样本提供者近 3 个月内不可接受抗生素治疗,以免造成肠道微生物的菌群改变。患者如在家中搜集样本,应该收集完成后迅速放入速冻容器中(干冰盒)并且在 1 天之内将其移到-80℃冻存(金标准)。  注:短链脂肪酸检测样本只能参照此标准进行取样。  B:将粪便样本保存在 95%乙醇溶液中,4 天内将其移到-80℃冻存。  C:将粪便样本保存在干冰中,尽快转入-20℃冰箱保存。  6.细胞的制备  样本量要求细胞个数>1×106个/样。细胞计数,生长到 2-3×106个,贴壁细胞需要先用胰酶消化或用细胞刮将细胞刮下,样本转移到 EP 管中,4℃,1000 rpm 离心 10 min,吸出上清液,将收集到的细胞用适量-20℃预冷的 PBS 清洗, 用移液器轻轻吹打,避免剧烈振荡造成细胞破碎,4℃,1000 rpm 离心 10 min 收集细胞,尽量将水分吸干,收集到的细胞放入-80℃冰箱进行低温保存。  7.肠道内容物的收集  样本量要求 1g 左右。在实验对象死亡后,用无菌解剖刀,在无菌状态下取出整个肠道,切取所需肠段的内容物(条件允许的话,可在无菌操作台进行),用无菌手术刀挖取内容物,立即放在冰上进行分装并标记,若需要重复测样,需要对样本进行分装,避免反复冻融,采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。  8.唾液样本的收集  样本量要求 500 uL/样。在采集唾液样本前 30 分钟,用饮用水将口腔内的杂物洗漱干净,用舌尖抵住上颚或下颚齿根以富集唾液,向采集漏斗中轻轻吐入唾液,直至液体唾液(非气泡)达到刻度线高度,手持唾液采集管,令其处于直立,并用另一只手协助将采集漏斗选下,从采集管底部取下采集管管盖,并用管盖将采集管拧紧,上下颠倒采集管几次,使唾液与唾液保存液充分混匀,将样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。  9.脑脊液样本的收集  样本量要求 400 uL/样。脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:动物轻度麻醉后,侧卧位固定,使头部及尾部向腰部尽量弯曲,剪去第七腰椎周围的被毛。消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤,右手持腰穿刺针垂直刺入,当有落空感及动物的后肢跳动时,表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔),抽去针芯,即见脑脊液流出。如果无脑脊液流出,可能是没有刺破蛛网膜。轻轻调节进针方向及角度,如果脑脊液流的太快,插入针芯稍加阻塞,以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。收集到的样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。  血清、血浆样本的分装  一、如果为采集全血后直接离心分装,则步骤如下:  血浆样本的分装:  1.用 EDTA/肝素抗凝的采血管采集完血液后,颠倒混匀;  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;  3.编号好分装需用的离心管;  4.离心完后取出上层血浆,按所得血浆体积分装,每份 100 μL;  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  血清样本的分装:  1.用未加抗凝剂的采血管采集完血液后,静置 30 min;  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;  3.编号好分装需用的离心管;  4.离心完后取出上层血清,按所得血清体积分装,每份 100μL;  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  二、如果为以前保存好的血清或血浆需要分装,则步骤如下:  1.将血清或血浆样本放在冰上解冻;  2.编号好分装需用的离心管;  3.解冻好后按样本体积分装,每份 100μL;  4.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  注意事项  氧化脂质检测样本需密封避光保存。
概要:用含有 EDTA(紫头管)或肝素(绿头管)的 5 mL 采血管(根据具体实验具体选择)采集血液 3 mL,采血后立即轻轻颠倒混匀采血管 5-10 次,以确保抗凝剂发挥作用,采血后需在 30 min 内尽快离心分离出血浆(若不能尽快离心,采集的血液需放在 4℃冰箱保存,并必须在 8 h 内完成离心及分装),4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血浆)100uL 置于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。  2.血清的制备  用不含抗凝剂的 5 mL 采血管(红头管)或者含有促凝剂的采血管(黄头管) 采集血样 3 mL,或将采好血样的采血管室温静置(注意:不能振摇采血管)30 min-60 min 使其凝结后,再将采血管放入离心机内,4℃条件下 3000 rpm,离心10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血清)100ul 分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血清保存于-80℃冰箱中。  注意事项  检查血浆或血清是否有溶血,如果发生溶血,重新采样。样本最多保存 2 年。氧化脂质检测样本需密封避光保存。  3.尿液的制备  取尿液大于 1mL,在 4℃保存,静置;取 1mL 尿液进行离心分离,4℃条件下, 10000 rpm,离心 5 min;吸取上清液 100 uL 分装于合适的已编号的 EP 管中, 如此重复分装成多管以避免反复冻融,尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。  4.组织的制备  取大约 200mg 以上质量的组织样本,用生理盐水清洗组织,将每 100mg 组织样本分装入管中以避免反复冻融,尽快将组织样本保存于液氮速冻。如果达不到液氮温度,尽可能的存放在-80℃冰箱中。  注意事项  需要注明组织部分,如胃肠道具体哪一段,肺脏具体是哪一叶,肝脏具体是哪一叶,肾脏是髓质还是皮质,肿瘤组织是边缘还是中心等。  5.粪便的制备  1)人粪便样本的采集  将粪便排泄到干净的容器中,尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染, 取同段样本或将所有样本混匀后再取样,用无菌勺对粪便进行挖取,将适量粪便样本放入无菌保存管中,样本需 1g 左右,对样本进行分装,以避免反复冻融, 采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行保存。  2)小鼠/大鼠粪便样本的采集  将待取样的小鼠/大鼠放进干净的铺有消毒滤纸的笼子里,排便后立即用灭菌的镊子夹到无菌冻存管中,小鼠粪便样本通常需要 6-8 粒,大鼠粪便样本 1-2 粒,若样本需要重复检测,可用无菌棒混匀后分装成几管,每管至少 200 mg,避免反复冻融,样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。  注意事项  根据样本搜集时实际条件的不同,可依次考虑如下几个搜集方式。其中 A 为金标准,B,C 搜集方式会导致一些代谢物的变化,但也可进行代谢组检测。  A:样本提供者近 3 个月内不可接受抗生素治疗,以免造成肠道微生物的菌群改变。患者如在家中搜集样本,应该收集完成后迅速放入速冻容器中(干冰盒)并且在 1 天之内将其移到-80℃冻存(金标准)。  注:短链脂肪酸检测样本只能参照此标准进行取样。  B:将粪便样本保存在 95%乙醇溶液中,4 天内将其移到-80℃冻存。  C:将粪便样本保存在干冰中,尽快转入-20℃冰箱保存。  6.细胞的制备  样本量要求细胞个数>1×106个/样。细胞计数,生长到 2-3×106个,贴壁细胞需要先用胰酶消化或用细胞刮将细胞刮下,样本转移到 EP 管中,4℃,1000 rpm 离心 10 min,吸出上清液,将收集到的细胞用适量-20℃预冷的 PBS 清洗, 用移液器轻轻吹打,避免剧烈振荡造成细胞破碎,4℃,1000 rpm 离心 10 min 收集细胞,尽量将水分吸干,收集到的细胞放入-80℃冰箱进行低温保存。  7.肠道内容物的收集  样本量要求 1g 左右。在实验对象死亡后,用无菌解剖刀,在无菌状态下取出整个肠道,切取所需肠段的内容物(条件允许的话,可在无菌操作台进行),用无菌手术刀挖取内容物,立即放在冰上进行分装并标记,若需要重复测样,需要对样本进行分装,避免反复冻融,采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。  8.唾液样本的收集  样本量要求 500 uL/样。在采集唾液样本前 30 分钟,用饮用水将口腔内的杂物洗漱干净,用舌尖抵住上颚或下颚齿根以富集唾液,向采集漏斗中轻轻吐入唾液,直至液体唾液(非气泡)达到刻度线高度,手持唾液采集管,令其处于直立,并用另一只手协助将采集漏斗选下,从采集管底部取下采集管管盖,并用管盖将采集管拧紧,上下颠倒采集管几次,使唾液与唾液保存液充分混匀,将样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。  9.脑脊液样本的收集  样本量要求 400 uL/样。脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:动物轻度麻醉后,侧卧位固定,使头部及尾部向腰部尽量弯曲,剪去第七腰椎周围的被毛。消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤,右手持腰穿刺针垂直刺入,当有落空感及动物的后肢跳动时,表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔),抽去针芯,即见脑脊液流出。如果无脑脊液流出,可能是没有刺破蛛网膜。轻轻调节进针方向及角度,如果脑脊液流的太快,插入针芯稍加阻塞,以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。收集到的样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。  血清、血浆样本的分装  一、如果为采集全血后直接离心分装,则步骤如下:  血浆样本的分装:  1.用 EDTA/肝素抗凝的采血管采集完血液后,颠倒混匀;  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;  3.编号好分装需用的离心管;  4.离心完后取出上层血浆,按所得血浆体积分装,每份 100 μL;  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  血清样本的分装:  1.用未加抗凝剂的采血管采集完血液后,静置 30 min;  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;  3.编号好分装需用的离心管;  4.离心完后取出上层血清,按所得血清体积分装,每份 100μL;  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  二、如果为以前保存好的血清或血浆需要分装,则步骤如下:  1.将血清或血浆样本放在冰上解冻;  2.编号好分装需用的离心管;  3.解冻好后按样本体积分装,每份 100μL;  4.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。  注意事项  氧化脂质检测样本需密封避光保存。
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  1.血浆的制备

  用含有 EDTA(紫头管)或肝素(绿头管)的 5 mL 采血管(根据具体实验具体选择)采集血液 3 mL,采血后立即轻轻颠倒混匀采血管 5-10 次,以确保抗凝剂发挥作用,采血后需在 30 min 内尽快离心分离出血浆(若不能尽快离心,采集的血液需放在 4℃冰箱保存,并必须在 8 h 内完成离心及分装),4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血浆)100uL 置于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。

 

  2.血清的制备

  用不含抗凝剂的 5 mL 采血管(红头管)或者含有促凝剂的采血管(黄头管) 采集血样 3 mL,或将采好血样的采血管室温静置(注意:不能振摇采血管)30 min-60 min 使其凝结后,再将采血管放入离心机内,4℃条件下 3000 rpm,离心10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血清)100ul 分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血清保存于-80℃冰箱中。

  注意事项

  检查血浆或血清是否有溶血,如果发生溶血,重新采样。样本最多保存 2 年。氧化脂质检测样本需密封避光保存。

 

  3.尿液的制备

  取尿液大于 1mL,在 4℃保存,静置;取 1mL 尿液进行离心分离,4℃条件下, 10000 rpm,离心 5 min;吸取上清液 100 uL 分装于合适的已编号的 EP 管中, 如此重复分装成多管以避免反复冻融,尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。

 

  4.组织的制备

  取大约 200mg 以上质量的组织样本,用生理盐水清洗组织,将每 100mg 组织样本分装入管中以避免反复冻融,尽快将组织样本保存于液氮速冻。如果达不到液氮温度,尽可能的存放在-80℃冰箱中。

  注意事项

  需要注明组织部分,如胃肠道具体哪一段,肺脏具体是哪一叶,肝脏具体是哪一叶,肾脏是髓质还是皮质,肿瘤组织是边缘还是中心等。

 

  5.粪便的制备

  1)人粪便样本的采集

  将粪便排泄到干净的容器中,尽量避免尿液、马桶壁等对粪便样本的污染, 取同段样本或将所有样本混匀后再取样,用无菌勺对粪便进行挖取,将适量粪便样本放入无菌保存管中,样本需 1g 左右,对样本进行分装,以避免反复冻融, 采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行保存。

  2)小鼠/大鼠粪便样本的采集

  将待取样的小鼠/大鼠放进干净的铺有消毒滤纸的笼子里,排便后立即用灭菌的镊子夹到无菌冻存管中,小鼠粪便样本通常需要 6-8 粒,大鼠粪便样本 1-2 粒,若样本需要重复检测,可用无菌棒混匀后分装成几管,每管至少 200 mg,避免反复冻融,样本采集后立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。

  注意事项

  根据样本搜集时实际条件的不同,可依次考虑如下几个搜集方式。其中 A 为金标准,B,C 搜集方式会导致一些代谢物的变化,但也可进行代谢组检测。

  A:样本提供者近 3 个月内不可接受抗生素治疗,以免造成肠道微生物的菌群改变。患者如在家中搜集样本,应该收集完成后迅速放入速冻容器中(干冰盒)并且在 1 天之内将其移到-80℃冻存(金标准)。

  注:短链脂肪酸检测样本只能参照此标准进行取样。

  B:将粪便样本保存在 95%乙醇溶液中,4 天内将其移到-80℃冻存。

  C:将粪便样本保存在干冰中,尽快转入-20℃冰箱保存。

 

  6.细胞的制备

  样本量要求细胞个数>1×107个/样,贴壁细胞需要先用胰酶消化或用细胞刮将细胞刮下,样本转移到EP管中,4℃,1000 rpm离心10 min,吸出上清液,将收集到的细胞用适量4℃预冷的PBS清洗,用移液器轻轻吹打,避免剧烈振荡造成细胞破碎,4℃,1000 rpm离心10 min收集细胞,尽量将水分吸干,收集到的细胞放入-80℃冰箱进行低温保存。

 

  7.肠道内容物的收集

  样本量要求 1g 左右。在实验对象死亡后,用无菌解剖刀,在无菌状态下取出整个肠道,切取所需肠段的内容物(条件允许的话,可在无菌操作台进行),用无菌手术刀挖取内容物,立即放在冰上进行分装并标记,若需要重复测样,需要对样本进行分装,避免反复冻融,采集好的样本立刻放入-80℃冰箱进行低温保存。

 

  8.唾液样本的收集

  样本量要求 500 uL/样。在采集唾液样本前 30 分钟,用饮用水将口腔内的杂物洗漱干净,用舌尖抵住上颚或下颚齿根以富集唾液,向采集漏斗中轻轻吐入唾液,直至液体唾液(非气泡)达到刻度线高度,手持唾液采集管,令其处于直立,并用另一只手协助将采集漏斗选下,从采集管底部取下采集管管盖,并用管盖将采集管拧紧,上下颠倒采集管几次,使唾液与唾液保存液充分混匀,将样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。

 

  9.脑脊液样本的收集

  样本量要求 400 uL/样。脑脊液的采集通常采取脊髓穿刺法:动物轻度麻醉后,侧卧位固定,使头部及尾部向腰部尽量弯曲,剪去第七腰椎周围的被毛。消毒后操作者在动物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮肤,右手持腰穿刺针垂直刺入,当有落空感及动物的后肢跳动时,表明针已达椎管内( 蛛网膜下腔),抽去针芯,即见脑脊液流出。如果无脑脊液流出,可能是没有刺破蛛网膜。轻轻调节进针方向及角度,如果脑脊液流的太快,插入针芯稍加阻塞,以免导致颅内压突然下降而形成脑疝。收集到的样本分装成 100uL 每管,放入-80℃冰箱保存。

  

血清、血浆样本的分装

  一、如果为采集全血后直接离心分装,则步骤如下:

  血浆样本的分装:

  1.用 EDTA/肝素抗凝的采血管采集完血液后,颠倒混匀;

  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;

  3.编号好分装需用的离心管;

  4.离心完后取出上层血浆,按所得血浆体积分装,每份 100 μL;

  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  血清样本的分装:

  1.用未加抗凝剂的采血管采集完血液后,静置 30 min;

  2.在 4℃条件下 3000 rpm 离心 10 min;

  3.编号好分装需用的离心管;

  4.离心完后取出上层血清,按所得血清体积分装,每份 100μL;

  5.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  二、如果为以前保存好的血清或血浆需要分装,则步骤如下:

  1.将血清或血浆样本放在冰上解冻;

  2.编号好分装需用的离心管;

  3.解冻好后按样本体积分装,每份 100μL;

  4.将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

  注意事项

  氧化脂质检测样本需密封避光保存。

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