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人和动物样品要求

日期:2016年6月18日 12:23

1,血浆的制备

用含有EDTA(紫头管)或肝素(绿头管)5 mL采血管(根据具体实验具体选择)采集血液3 mL,采血后立即轻轻颠倒混匀采血管510次,以确保抗凝剂发挥作用,采血后需在30 min内尽快离心分离出血浆(若不能尽快离心,采集的血液需放在4℃冰箱保存,并必须在8 h内完成离心及分装),4℃条件下3000 rpm离心10 min-15 min(可根据试验方案进行适当调整),取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血浆)100uL置于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血浆保存于-80℃冰箱中。

2,血清的制备

用不含抗凝剂的5 mL采血管(红头管)或者含有促凝剂的采血管(黄头管)采集血样3 mL,或将采好血样的采血管室温静置(注意:不能振摇采血管)30 min-60 min使其凝结后再将采血管放入离心机内,4条件下3000 rpm,离心10 min15min(可根据试验方案进行适当调整)取出采血管置试管架中(冰上操作),吸取上清液(即血清)100ul分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管血清以避免反复冻融,尽快将血清保存于-80℃冰箱中

注意事项

检查血浆或血清是否有溶血如果发生溶血,重新采样。样本最多保存2年。

 

3,尿液的制备

取尿液大于1mL,在4℃保存,静置;取1mL尿液进行离心分离,4℃条件下10000 rpm离心5 min吸取上清液100 uL分装于合适的已编号的 EP 管中,如此重复分装成多管以避免反复冻融,尽快将尿液保存于-80℃冰箱中。

 

4,组织的制备

取大约200mg以上质量的组织样本,用生理盐水清洗组织,将每100mg组织样本分装入管中以避免反复冻融,尽快将组织样本保存于液氮速冻。如果达不到液氮温度,尽可能的存放在-80冰箱中。

注意事项

需要注明组织部分,如胃肠道具体哪一段,肺脏具体是哪一叶,肝脏具体是哪一叶,肾脏是髓质还是皮质,肿瘤组织是边缘还是中心等。

5,粪便的制备

取大约200mg以上粪便样本,将每100mg粪便样本分装入管中,并迅速放入-80℃冻存。

注意事项

根据样本搜集时实际条件的不同,可依次考虑如下几个搜集方式。其中A为金标准,BC搜集方式会导致一些代谢物的变化,但也可进行代谢组检测。

A 样本提供者近3个月内不可接受抗生素治疗,以免造成肠道微生物的菌群改变。患者如在家中搜集样本,应该收集完成后迅速放入速冻容器中(干冰盒)并且在1天之内将其移到-80℃冻存(金标准)。

B 将粪便样本保存在95%乙醇溶液中,4天内将其移到-80℃冻存。

C 将粪便样本保存在干冰中,尽快转入-20℃冰箱保存。

6,细胞的制备

细胞归一化,在样品收集后进行每管样品的细胞计数,稀释处理后使每管细胞浓度保持一致。每个生物学重复取相同的一体积细胞悬浊液(至少保证1Volume = 107 cells)。离心收集后用PBS清洗3-5次,以去除胞外物质;将清洗好的样本装入离心管中(盖上管盖),直接放入液氮罐中淬灭细胞 (无需研磨,此项过程的目的是灭活);将淬灭过的细胞样本放入-80℃冷冻。

 

 

血清,血浆样本的分装

 

一、如果为采集全血后直接离心分装,则步骤如下:

血浆样本的分装

1. EDTA/肝素抗凝的采血管采集完血液后,颠倒混匀

2. 4℃条件下3000 rpm离心10 min

3. 编号好分装需用的离心管;

4. 离心完后取出上层血浆,按所得血浆体积分装,每份100 μL;

5. 将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

血清样本的分装

1. 用未加抗凝剂的采血管采集完血液后,静置30 min

2. 4℃条件下3000 rpm离心10 min

3. 编号好分装需用的离心管;

4. 离心完后取出上层血清,按所得血清体积分装,每份100 μL;

5. 将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

 

二、如果为以前保存好的血清或血浆需要分装,则步骤如下:

1. 将血清或血浆样本放在冰上解冻;

2. 编号好分装需用的离心管;

3. 解冻好后按样本体积分装,每份100 μL;

4. 将分装后的样本按顺序分别用冻存盒装好,-80℃保存。

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